隨著生命科學(xué)的發(fā)展，圍繞蛋白進(jìn)行的研究越來(lái)越多，抗體試劑在實(shí)驗(yàn)中的重要性越來(lái)越舉足輕重。面臨著紛呈復(fù)雜的抗體試劑市場(chǎng)，如何選擇到適合自己實(shí)驗(yàn)的抗體就變得尤為重要。
當(dāng)我們要檢測(cè)目的蛋白在組織中表達(dá)情況的時(shí)候，如何選擇適合我們實(shí)驗(yàn)需要的抗體，并恰當(dāng)保存使用，是每個(gè)科研人員需要細(xì)心考慮的?？贵w種類(lèi)繁多，品牌眾多，技術(shù)參數(shù)不一，價(jià)格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購(gòu)買(mǎi)到高質(zhì)量?jī)r(jià)格合適的抗體，并準(zhǔn)確地做出我們想要的結(jié)果，其中有很多細(xì)節(jié)需要注意。
關(guān)于抗體特異性的選擇：
特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。
?。?）蛋白特異性
針對(duì)需要檢測(cè)的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測(cè)，對(duì)抗體的要求是不一樣的，注意查看抗體說(shuō)明書(shū)的檢測(cè)說(shuō)明。如果重組蛋白不是全長(zhǎng)表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對(duì)，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測(cè)需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在，不宜一概而論。
?。?）種屬特異性
同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說(shuō)明書(shū)注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過(guò)蛋白的序列比對(duì)，選擇同源序列免疫的抗體，不過(guò)一般這種情況生產(chǎn)商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品，則利于抗體選擇。
?。?）實(shí)驗(yàn)方法特異性
目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多，不同的使用方法過(guò)程中，因?yàn)閷?duì)蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對(duì)抗體的識(shí)別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。具體的根據(jù)說(shuō)明書(shū)注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會(huì)將每個(gè)抗體都進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)，目前檢測(cè)比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)方法沒(méi)有找到合適的抗體的，可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。同樣，申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品是個(gè)很好的途徑。
?。?）標(biāo)記物的特異性
一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會(huì)使用帶有標(biāo)記的一抗，比如WB、IHC等，都是通過(guò)二抗類(lèi)的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn)，可能就會(huì)使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測(cè)到的熒光范圍，針對(duì)不通的參數(shù)要求選擇對(duì)應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要選配不同的熒光標(biāo)記物。
