免疫親和磁珠-白醋黃曲霉毒素-光化學衍生/HPLC應用
免疫親和磁珠-白醋黃曲霉毒素-光化學衍生/HPLC應用
1.前言
本方法采樣免疫親和磁珠凈化結(jié)合柱后光化學衍生-HPLC方法檢測了白米醋中的4種黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2。樣品提取后經(jīng)過免疫親和磁珠凈化,進入HPLC系統(tǒng)進行分離,定量。四種黃曲霉毒素1ppb和200ppb的加標回收率均大于100%,CV小于10%。實驗證明,該方法可有效、準確的用于白米醋等樣品中黃曲霉毒素的測定。
2.樣本前處理方法
稱取5g待測樣品,加入20mL提取液,渦旋提取20min,然后7000r離心5min。取1mL上清液進入樣品孔,將黃曲霉毒素凈化試劑預裝板條(Cat.71101)放入海貍?cè)詣觾艋瘍x,運行程序。程序運行結(jié)束后收集洗脫液,過0.22μm濾膜,待測。
3.實驗條件
HPLC方法(光化學柱后衍生) | |
色譜柱 | C18 柱(柱長 150 mm 或 250 mm,柱內(nèi)徑 4.6 mm,填料粒徑 5 μm),或性能相當色譜柱 |
熒光檢測波長 | 激發(fā)波長 360 nm;發(fā)射波長 440 nm。 |
流動相A | 甲醇-乙腈(體積比,50:50) |
流動相B | 水 |
等度洗脫 | A:B = 35:65 |
流速 | 1.0 mL/min |
柱溫 | 40 ℃ |
進樣量 | 20 μL |
4.樣品分析
分別配制四種黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的混合標準溶液1ppb和200ppb,按照上述HPLC方法分析1ppb加標回收率為105.7%,200ppb加標回收率為121.95%。
樣品名稱 | 樣品質(zhì)量/g | 加標 | 提取液 | 回收率 |
白米醋 | 5.09 | 200ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 122.20% |
白米醋 | 5.07 | 200ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 121.70% |
白米醋 | 5.00 | 1ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 109.00% |
白米醋 | 5.00 | 1ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 102.40% |
圖1 白米醋樣品(1ppb)色譜圖(上)和黃曲霉毒素標準譜圖(下)分別是黃曲霉毒素G2,G1,B2,B1
5.結(jié)論
本方法采樣免疫親和磁珠凈化結(jié)合柱后光化學衍生-HPLC方法檢出了白米醋中的4種黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2。在保證四種黃曲霉毒素的分離度的前提下,將凈化時間縮短至1小時左右,效果明顯。實驗證明該方法可用于實際樣品中黃曲霉毒素的準確測定。